Material

Frascos

1. Potes de plástico de 140 mL (encontrados em casas de embalagem ou de produtos para sorveteria).

Solução de hidróxido de sódio (40 g/L)

1. Hidróxido de Sódio – NaOH (2 g) (pode ser soda cáustica);
2. Seringa de 20 mL.

Solução de água sanitária a 5 %

1. Água sanitária (preferência um frasco novo);
2. Medidor de volume (proveta – farmácias especializadas, ou seringa de 20 mL);

Meio de Cultura

1. Ágar-ágar (Merck®, Brasileiro® ou Kanten®);
2. Água destilada ou mineral;
3. Produto contendo os componentes de meio de cultura específico para orquídeas (B&G Flores® – Meio de Cultura Suprimento: Orquídea);
4. Panela de vidro, ou de teflon, ou de aço;
5. Filme de PVC;
6. Água sanitária (de preferência um frasco novo);
7. Seringa de 20 mL;
8. Medidor de volume (proveta – farmácias especializadas, ou potes de cozinha);
9. Solução de NaOH (40 g/L);

Recultivo

1. Seringas de 20 ou 25 mL e de 5 ou 10 mL.;
2. Agulhas finas (tamanho aprox. 25/7);
3. Agulhas grossas (tamanho aprox. 40/16);
4. Solução de água sanitária a 5 %;
5. Sementes da(s) planta(s) que se deseja reproduzir;
6. Filme de PVC;
7. Etiquetas adesivas;
8. Lápis ou caneta;
9. Água sanitária (de preferência um frasco novo);
10. Frascos com meio de cultura esterilizados com água sanitária.

Procedimentos

Para o preparo da solução de hidróxido de sódio (40 g/L)

1. Com o auxílio da seringa de 20 mL, coloque 50 mL de água destilada ou mineral em um recipiente de plástico;
2. Pese e acrescente à água 2 g de NaOH.

Para o preparo da solução de água sanitária a 5 %

1. Tomar uma seringa esterilizada de 20 mL.
2. Com a seringa esterilizada succionar 1 mL de água sanitária.
3. Na mesma seringa succionar mais 19 mL de água esterilizada, ou seja, completar o volume até os 20 mL (água sanitária à 5 %). Reserve esta seringa.

Para o preparo de 1 L do meio de cultura devem-se seguir os seguintes passos:

1. Antes de começar a prepara o meio de cultura deixe os frascos de plásticos sobre uma bancada no jeito de receberem o meio de cultura. Para isso, retire, rapidamente, os frascos da embalagem, coloque-os sobre a bancada e cubra-os com suas tampa, mas sem fechá-los, deixando as tampas soltas.
2. Coloque na panela 1 L de água destilada ou mineral;
3. Pese e acrescente a 1 L de água destilada ou mineral 47 g (1 sachê) do Meio de Cultura Suprimento da B&G flores®;
4. Pese e acrescente à água, ainda fria, o ágar-ágar (7 g/L de ágar-ágar Merck®, Vetec® ou Brasileiro®, ou 10 g/L de ágar-ágar Kanten®);
5. Misture bem todos os ingredientes do meio;
6. Leve a panela, contendo toda a mistura, ao fogo. Espere levantar fervura, depois desligue o fogo;
7. Espere esfriar por 10 minutos;
8. Acrescente 25 mL de água sanitária pura (use a seringa para medir);
9. Acrescente 3 mL da solução de NaOH (40 g/L);
10. Distribua o meio, com o auxílio de um pote de plástico com bico e alça, nos frascos de plásticos. Coloque, aproximadamente, 1 cm de altura de meio de cultura (+/- um dedo de altura – 40 mL por frasco);
11. Agora, feche completamente os frascos com suas tampas;
12. Passe o filme de PVC em torno da tampa, dando duas voltas nessa. Para isso corte o filme de PVC de forma que fique com, aproximadamente, 5 cm de comprimento.

Para o semeio devem-se seguir os seguintes passos:

1- Tome uma seringa esterilizada de 10 mL.;
2- Com a seringa de 10 mL, já com a agulha fina, retire o seu êmbolo e coloque uma pitada de sementes. Recoloque o êmbolo;
3- Succione aproximadamente 5 mL de água sanitária à 5 % que está dentro da seringa de 20 mL. Para isto, basta inserir a agulha fina pelo orifício na ponta da seringa de 20 mL. Elimine o ar de dentro da seringa e agite a suspensão de sementes por 13 min;
4- Retire a agulha fina;
5- Abra o frasco contendo o Meio de Cultura Suprimento da B&G flores®;
6- Proceda o semeio no frasco injetando 1 mL por frasco da suspensão de sementes, fazer movimentos circulares com o frasco visando a distribuição das sementes por toda a superfície do meio de cultura;
7- Cobrir a tampa com filme de PVC e proceder a identificação do frasco colando a etiqueta adesiva, que já contem a identificação do semeio, nesse;
8- Em cultivos comerciais ou laboratório, manter sob condições de sala de cultivo, e em cultivos domésticos manter sob condições de luz indireta, como por exemplo, uma prateleira próxima a uma janela, em uma varanda, ou mesmo no orquidário.